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無塵室沉降菌測試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程
發(fā)布時(shí)間:2015-05-15 15:48:25   瀏覽:8122

無塵室沉降菌測試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

 

1、菌落:細(xì)菌培養(yǎng)后,由一個(gè)或幾個(gè)細(xì)菌繁殖而形成的一細(xì)菌集落,簡稱CFU。通常用個(gè)數(shù)表示。

2、測試方法:沉降法,即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿,經(jīng)48小時(shí)以上培養(yǎng),在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù),來評定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù),并以此來評定無塵室的潔凈度。

3、所用的儀器和設(shè)備

1)高壓消毒鍋:使用時(shí)參照文件GZ-ZL-SOP-066-00進(jìn)行操作。

2)恒溫培養(yǎng)箱:必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。

3)培養(yǎng)皿:一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使用前將培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘。

4、培養(yǎng)基:普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加熱熔化,冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿,每皿約15m1。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后,將培養(yǎng)基平皿放入30~35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)數(shù)小時(shí),若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長,即可供采樣用,制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2~8℃的環(huán)境中存放。

5、測試步驟

1)采樣方法:將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先確定的取樣點(diǎn),打開培養(yǎng)皿蓋,使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時(shí),再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。
2)培養(yǎng),時(shí)間不少于48小時(shí)。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗(yàn),檢查培養(yǎng)基本身是否污染,可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。

3)菌落計(jì)數(shù):用肉眼直接計(jì)數(shù),然后用5~10倍放大鏡檢查,有否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊,可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落計(jì)數(shù)。

6、注意事項(xiàng)

1)測試用具要做滅菌處理,以確保測試的可靠性、正確性。

2)采取一切措施防止人為對樣本的污染。

3)對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。

4)由于細(xì)菌種類繁多,差別甚大,計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察,不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落,并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別,必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

5)采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量,如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。

7、測試規(guī)則

1)測試狀態(tài)

(1)沉降菌測試前:被測試無塵室(區(qū))的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求,靜壓差、必須控制在規(guī)定值內(nèi)。被測試無塵室(區(qū))已消毒。

(2)測試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種,并在報(bào)告中注明測試狀態(tài)。

(3)測試人員:測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服。靜態(tài)測試時(shí),室內(nèi)測試人員不得多于2個(gè)人。

2)測試時(shí)間

(1)對單向流,如100級(jí)凈化房間內(nèi)及層流工作臺(tái),測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10分鐘后開始。

(2)對非單向流,如10000級(jí)、100000級(jí)以上的凈化房間,測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘開始。

8沉降菌計(jì)數(shù)
1)最少采樣點(diǎn)數(shù)目:可按表1確定。在滿足最少測點(diǎn)數(shù)的同時(shí),還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù),見表2。

表1 最少采樣點(diǎn)數(shù)目

面積(m2) 

潔凈度級(jí)別

 

100 

10000 

100000 

300000

<10 

2~3 

2

≥10~<20 

2

≥20~<40 

2

≥40~<100 

16 

2

≥100~<200 

40 

10 

3

注:表中的面積對于單向流無塵室是指送風(fēng)面積,對于非單向流無塵室是指房間面積。

表2 最少培養(yǎng)皿數(shù)

潔凈度級(jí)別 

所需Φ90mm培養(yǎng)皿數(shù)(以沉降0.5小時(shí)計(jì))

100

 14

10000

2

100000

 2

300000

2

2)采樣點(diǎn)的布置:工作區(qū)測試點(diǎn)位置離地0.8~1.5m左右(略高于工作面)??稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測點(diǎn),采樣點(diǎn)的布置應(yīng)力求均勻,避免采樣點(diǎn)在某局部區(qū)域過于集中,某局部區(qū)域過于稀疏。

3)記錄:測試報(bào)告中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度、壓差、測試狀態(tài)及測試數(shù)據(jù)。

4)結(jié)果計(jì)算:用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。平均菌落數(shù)的計(jì)算見下式:m1+m2+……+mn

平均菌落數(shù)m=n

式中:m為平均菌落數(shù);m1為1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù);m2為2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù);mn為n號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù);n為培養(yǎng)皿總數(shù)。

5)結(jié)果評定:用平均菌落數(shù)判斷無塵室的空氣中的微生物。

6)無塵室(區(qū))內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標(biāo)準(zhǔn)(見表3)。

表3

潔凈級(jí)別 

100級(jí) 

10000級(jí) 

100000級(jí) 

300000級(jí)

標(biāo)準(zhǔn)(平均) 

1個(gè)/皿 

3個(gè)/皿 

10個(gè)/皿 

15個(gè)/皿

7)若某無塵室(區(qū))的平均菌落數(shù)超過評定標(biāo)準(zhǔn),則必須對此區(qū)域先行消毒,然后重新測試兩次,測試結(jié)果必須合格。

主要參考文獻(xiàn):國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16294-1996

原文來源:http://www.m.ynotskydive.com/   黃生13570963007

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