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細胞培養(yǎng)操作過程要使用超凈工作臺
發(fā)布時間:2012-06-11 06:05:39 瀏覽:10142
細胞培養(yǎng)操作過程要使用超凈工作臺
目的:建立一套適用的培養(yǎng)操作規(guī)程,進行無污染條件下體外細胞擴大培養(yǎng)。
主體內容:
操作步驟:
1、紫外燈照射超凈工作臺30分鐘(根據實際情況,可適當延長或縮短照射時間,但時間長一點總比時間短一點安全。)
2、將培養(yǎng)液、PBS、胰酶放在37℃水浴中溫育(每次用多少,溫育多少,這樣既可節(jié)約溫育的時間,又可延長藥品的使用期限。)
3、超凈工作臺照射30分鐘后,關閉紫外,打開照明,打開排風10分鐘后再次進入細胞培養(yǎng)室。(注意:要打開排風10分鐘后再進行操作,這樣才能保證循環(huán)的風是無菌的。同時還會避免有菌的風直接吹到人的呼吸道中,對人體也有一定的保護作用)
4、戴上口罩及手套(有條件的最好戴上帽子,不過也沒關系,我們實驗室就沒戴)
5、用70-75%的酒精擦試實驗物品,然后拿入超凈工作臺中。
6、操作時注意以下幾點:盡量在酒精燈火焰附近操作,但如果管子里有細胞就要離火焰有一定距離了,否則細胞要燙死了;不要重復使用移液管(即吸一次后,就換新的管);不要在敞開的容器上方操作;手上的酒精不要擦太多,否則靠近酒精燈時容易把手燒到(我想很多人都有過被燒的經歷吧);
其實操作是很簡單的,但一定要仔細。尤其是第2步許多人都不注意,細胞平時放在37℃培養(yǎng),如果加入的PBS或胰酶溫度太低,會對細胞有操傷的,雖然這種損傷短期內察覺不到,但時間長了,就會顯現(xiàn)出來。
來源:http://www.m.ynotskydive.com/ 蘇布會-13570963006
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