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超凈工作臺在胡蘿卜愈傷組織建立實驗中的應(yīng)用
一、 材料和設(shè)備
超凈工作臺或者無菌接種室
培養(yǎng)基 N6+2 mg/L 2,4-D
帶有吸水紙的成套的培養(yǎng)皿,無菌水
解剖刀、槍型鑷子、刀片
無病蟲的胡蘿卜直根數(shù)十個
消毒劑 0.2%的升汞溶液
70%酒精、95%酒精及70%的酒精棉球
l000毫升的玻璃燒杯數(shù)個、酒精燈、火柴、記號筆、小刷子(可用一次性牙刷)
二、實驗材料 新鮮胡蘿卜、胡蘿卜愈傷組織
三、實驗步驟'
1 選擇無傷、無病、形狀較規(guī)則的胡蘿卜,用小刷子在流動的自來水下洗刷胡蘿卜,除凈表面所有的泥屑??梢愿鶕?jù)實驗的時期,選用其它的實驗材料。
2 將胡蘿卜切成大約 40 mm厚的片段,放入100或500 ml的燒杯中,倒入消毒液,將植物材料覆蓋、浸泡10-30 min。在滅菌過程中,在每個材料上做好標記,并對應(yīng)地放在預(yù)接種的培養(yǎng)基邊上。接種后在培養(yǎng)瓶上標明培養(yǎng)物名稱和培養(yǎng)日期。
3 在超凈工作臺上,倒掉消毒液,用無菌水沖洗3-5次,以便去除殘留的消毒液。
4 取消毒過的胡蘿卜放入已滅菌的帶有濾紙的培養(yǎng)皿中,用無菌解剖刀從兩端各切去10毫米,再將留下的胡蘿卜直根切成一系列一毫米厚的橫切片。取其中的一片轉(zhuǎn)到另一個已滅菌的帶有吸水紙的培養(yǎng)皿中,再將每一片切成小塊,使其每個小塊上均包含木質(zhì)部、形成層和韌皮部,外植體的大小要盡量一致。
5 接種 取下培養(yǎng)瓶的塞子(或錫鉑紙),用火灼燒瓶口2 cm處,手持培養(yǎng)瓶呈45º角,用消毒鑷子把4-8塊外植體轉(zhuǎn)到瓊脂培養(yǎng)基的表面,注意把靠近根尖的一面接觸培養(yǎng)基。然后立即將燒過的封口棉塞或錫鉑紙封住瓶口。每兩次轉(zhuǎn)移之間都要用酒精燈灼燒鑷子,防止帶菌。
6 培養(yǎng) 接種好的外植體在25℃的培養(yǎng)箱中,黑暗條件下培養(yǎng)四周左右就會形成一塊較大的愈傷組織。
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